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默科生产的蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB 法)，即 Protein Cysteine Assay Kit with DTNB，也称蛋白质半胱氨酸含量检测试剂盒， 是一种高效、便捷的用于细胞培养上清液、血清、血浆、细胞及组织裂解液样品中暴露的或表面的游离巯基(Exposed/Surface free sulfhydryl groups)和埋藏于蛋白内部的游离巯基(Buried free sulfhydryl groups)以及蛋白质中的二硫键(-S-S-, Disulfide bonds)被还原后的巯基检测试剂 盒。本试剂盒采用显色法(吸光度法)进行检测。
本试剂盒采用经典的基于 DTNB 的游离巯基定量检测方法。5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸) (5,5'-Dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid), DTNB)， 又称为 6,6′-二硝基-3,3′-二硫代苯甲酸、Ellman 试剂(Ellman Reagent)、二硫代硝基苯甲酸或双(3-羧基-4-硝基苯基)二硫，是一种与巯基 相互作用的水溶性试剂，可用于组织、蛋白质和多肽中巯基含量测定，基本反应原理如下：样品中的蛋白质通过变性处理，原有构像发 生改变，蛋白质肽链松散开，二硫键或者巯基暴露，还原剂将二硫键还原成巯基(-SH)，巯基(R-SH)与 DTNB 反应生成黄色可检测的 2- 硝基-5-硫代苯甲酸盐阴离子(TNB)和混合二硫化物(R-S-TNB)，TNB 在 412nm 处有强吸收峰，测定此处的吸光度，并以谷胱甘肽为标准 品，可计算出样品中半胱氨酸的含量。本试剂盒不仅可检测暴露的或表面的游离巯基，还可以检测蛋白质高级结构中的游离巯基，以及 蛋白质中二硫键还原后产生的游离巯基。如需检测总游离巯基，可使用总巯基检测试剂盒(DTNB 法)；如需检测蛋白质中二硫键的含量， 可以使用蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB 法) ，同时设置未进行步骤 3b 中设置未添加 Reduction Buffer 的样品组，通过相应的差值就 能计算出蛋白质中的二硫键含量；如需检测游离巯基，可使用游离巯基检测试剂盒(DTNB 法) ，配合总巯基检测试剂盒(DTNB 法)即可计 算出蛋白质高级结构中的游离巯基含量；如需检测谷胱甘肽，可使用总谷胱甘肽检测试剂盒、GSH 和 GSSG 检测试剂盒。
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